裸鼠HepG2細胞皮下成瘤與肝內成瘤的實驗研究

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?原發性肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,據統計,肝癌年死亡率占所有腫瘤年死亡率的第二位,我國肝癌發病率及死亡率更是居世界之首,占每年肝癌新發病率及死亡人數的55%,且有逐年增加的趨勢。因其惡性程度高,侵襲性強,生長快,易復發轉移等生物學特性,被稱為“癌中之王”。盡管目前各種手術、化療等治療手段在不斷提高,但效果仍欠佳。近年來,隨著分子生物學技術、基因組學的蓬勃發展,肝癌的基因治療已成為當前肝癌治療研究的熱點。

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?建立腫瘤動物模型是研究腫瘤發病機制及開展腫瘤治療相關研究的重要手段。動物模型應該盡可能的接近人類腫瘤的自然生物學過程,包括腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移。建立良好的肝癌動物模型對于模擬人體肝癌形成及抗腫瘤免疫應答研究具有很好的替代作用。

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?目前實驗室中常用的是移植型肝癌模型,移植型模型根據移植瘤所在部位可分為原位型和異位型。通過向裸鼠肝臟注射肝癌細胞建立肝臟原位腫瘤模型,觀察其原位成瘤的過程及狀態,能較好的模擬人體肝癌生長過程,為進一步抗肝癌免疫研究提供實驗動物模型;而異位型多見于在實驗動物背部皮下注射一定量的肝癌細胞形成腫瘤,皮下瘤操作簡單容易掌握,成功率高,且腫瘤體積變化易于測量,容易給予局部干預。

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?武漢云克隆可為您提供裸鼠肝內成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗模型,并可根據您的具體要求完成相應的后續實驗。

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?裸鼠肝臟原位成瘤實驗方法:

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?1)將標準條件下培養的處于對數生長期的熒光素酶基因標記的腫瘤細胞人肝癌細胞株HepG2-luc消化、離心,將所得的約5×106個細胞溶于0.1 mL DMEM培養液待用。

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?2)使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠(SPF級無胸腺Balb/C-nude裸鼠,雄性,周齡為4~5周,體重為15g~20g),待麻醉生效后,開腹暴露肝臟,用1ml胰島素注射針取準備好的細胞注射于裸鼠肝臟內,用5-0絲線縫合傷口,活力碘消毒傷口,將裸鼠放在加熱墊上,待清醒后正常飲食飼養。

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?3)熒光活體成像檢測:在成瘤后對裸鼠進行熒光活體成像檢測,成像前使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠,再通過腹腔注射3mg底物luciferin,底物注射10分鐘后進行熒光活體成像檢測。圖1為裸鼠HepG2-luc細胞肝臟原位注射1周后熒光活體成像圖。

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?4)四周后頸椎離斷,處死小鼠,解剖尸體,觀察肝臟腫瘤生長狀況。所有可疑組織均做好標記,拍照。圖2為裸鼠HepG2-luc細胞肝臟原位注射4周后肝臟圖。

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?而裸鼠皮下成瘤實驗只需將標準條件下培養的處于對數生長期的HepG2細胞消化、離心,將所得的約5×106個細胞溶于 0.1 mL DMEM培養液,注射于裸鼠右側背部皮下即可。選擇的裸鼠一般在4-6周齡,體重15-20g左右,接種時,針頭在皮下進針深一點,約25px深,減少注射后細胞懸液從針眼溢出。接種后一周左右可以見到皮下開始出現腫塊,四周左右出現皮下成瘤。圖3為裸鼠HepG2細胞皮下注射4周后裸鼠圖。

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